雙向凝膠電泳儀是基于蛋白質電點不同用等電聚焦分離的,雙向凝膠電泳儀和凝膠成像儀同樣運用比較多,那么,雙向凝膠電泳儀和凝膠成像儀有什么區(qū)別?
雙向凝膠電泳儀第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。根據(jù)蛋白質的等電點和分子量大小,分別在凝膠介質二維空間上對蛋白質分子進行等電點聚焦和電泳來分離與純化蛋白質。
雙向電泳就是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合。
1、 先進行等電聚焦電泳(按照蛋白等電點pI分離):在膠中加入雙性電解質溶液,加上電場后建立穩(wěn)定PH梯度,蛋白質溶液加入后建立電場,蛋白以不同PI分離開來。
2、然后再進行SDS-PAGE(按照分子大小):將上一步的膠加上橫向電場,同一PI中聚集的蛋白,由于分子量不同而分開。
3、經(jīng)染色(一般是銀染)得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。
二維電泳使用于蛋白組學研究,對大批量蛋白篩選鑒定中存在很大優(yōu)勢,通過不同膠做對比,把不同處的膠割出來單獨鑒定。
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